甘草提取物检测方法

GRAVIMETER重量法：传统测定甘草酸含量的方法是根据甘草酸遇酸沉淀或酸碱反应的理化性质采取重量法或滴定法测定。重量法是将甘草酸提取液进行过滤，加入浓盐酸或硫酸，使甘草酸沉淀析出，过滤烘干后精密称量，即得到样品中含有的甘草酸质量。重量法测甘草酸：取本品约6g，精密称定，加水50ml溶解后，移至100mI量瓶中，用乙醇稀释至刻度，混匀，静置12小时，精密吸取上清液25ml置烧杯中，加氨试液3滴，置水浴上蒸发至稠膏状，加水30ml使溶解，缓缓加入盐酸溶液（3→10）5mI，在冰水中静置约30分钟，滤过，沉淀用冰水洗涤4次，每次5ml，弃去洗液及滤液，沉淀在滤纸上放置约2~3小时，使水分自然挥散，再用预先加热至60~70℃的乙醇10ml使沉淀溶解，滤过，滤器用热乙醇洗涤至洗液无色，合并乙醇液，置已干燥至恒重的烧杯中，在水浴上蒸干，并在105℃干燥3小时，精密称定，计算供试品中甘草酸的含量，即得。本品含甘草酸不得少于20.0%
HPLC液相检测方法：

（1）色谱条件。色谱柱为Diamonsil(钻石)C18(250mm×4.6mm),粒度5μm,流动相:甲醇-0.2mol/L醋酸铵溶液-冰醋酸(61∶39∶1),柱温:25℃,流速:1ml/min,检测波长:250nm；

（2）对照品溶液的制备。精密称取甘草酸单铵盐对照品 适量,加流动相制成每1ml含0.2mg的溶液(折合甘草酸为 0.1959mg),即得；

（3）供试品溶液的制备。取甘草提取物样品0.1g,精密 称定,置具塞锥形瓶中,精密加入流动相25ml,称定重量,超声处理20min,取出,放冷,再称定重量,用流动相补足减失重量,摇匀,滤过,即得；

（4）标准曲线的制备。精密吸取甘草酸单铵盐对照品液(0.2172mg/ml)2、6、10、14、18μl分别注入液相色谱仪,记录 色谱,以峰面积(A)对质量数(C)进行线性回归计算；

（5）精密度试验。分别精密吸取供试品溶液10μl,重复进样5次,按正文所述色谱条件测定,记录色谱,计算；

（6）重现性试验。取样品按供试品溶液制备方法制备5 份供试品溶液,分别精密吸取供试品溶液10μl进样,记录色谱,计算；

（7）加样回收率试验。准确称取已知含量的样品0.05g；

（8）空白试验。按处方比例及生产制备方法,按供试品溶液制备项下制备阴性溶液,进样10μl,记录色谱图；

（9）测定法。分别精密量取对照品溶液与供试品溶液各10μl,注入液相色谱仪,测得。